Floresans, mikroskopning: usulning tamoyillari

engil yanada noorganik va organik suyuqliklar singdirish va qayta emissiya Fosforlamanın yoki fluoressensiya natijasidir. hodisalar o'rtasidagi farq nur oqi singishi va emissiya o'rtasidagi interval muddati hisoblanadi. Bu jarayonlarning nurlanish Fosforlamanın esa, deyarli bir vaqtning o'zida sodir bo'lganda - ba'zi kechikish bilan.

tarixiy ma'lumotlar

1852-yilda, ingliz olimi Stokes, birinchi florasanı tasvirlangan. U bilan bir qator tajribalari natijasida, yangi muddatni joriy qalay shpati, ultrabinafsha nur ostida qizil nur chiqaradi. Stokes qiziqarli hodisani qayd etdi. Bu lyuminestsent nurlanish to'lqin uzunligi har doim uyg'onishi yorug'lik oqimi katta, deb topildi.

19-asrda gipotezasini tasdiqlash uchun u erda juda ko'p tajribalar edi. Ular turli namunadir ultrabinafsha nur ta'sirida fluoresce ekanligini ko'rsatdi. materiallar orasida, boshqa narsalar, bo'lgan kristallar, smola, minerallar, xlorofill, xom dorilar, noorganik birikmalar, vitaminlar, yog'lar orasida. biologik testlar, bo'yoqlar to'g'ridan-to'g'ri foydalanish 1930 yilda faqat boshladi

Floresans, mikroskopning: Tavsif

20 asr tadqiqotlar birinchi yarmida ishlatiladigan materiallarning Ba'zi yuqori xususiyatini namoyish. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. usullarini qarama tomonidan erishilgan bo'lmadi bajarish, tufayli, nurlanish mikroskop usuli biotibbiyotshunolik va biologik tadqiqotlar muhim vositasi bo'lib kelgan. Teng muhim natijalar qo'lga va materiallar uchun qilingan.

? Nima afzalliklari nurlanish mikroskop usuli qilsa? yangi materiallar foydalanish mumkin bo'ladi va juda aniq hujayra submicroscopic komponentlarini tanlash etdi. Floresans, mikroskopning yagona molekulalarni aniqlash mumkin. bo'yoqlar turli vaqtning o'zida bir nechta ob'ektlar aniqlashni imkonini beradi. o'z navbatida, namunadagi maxsus xususiyatlari bog'liq, uskunalari, sinishi limiti cheklangan kora o'lchamlari qaramay, bu darajada quyida molekulalar aniqlash, shuningdek, ancha mumkin. nurlanish ko'rgazma otofloresans keyin turli namunalari. Bu hodisa keng petrolojisi, botanika, yarimo'tkazgich sanoatida ishlatiladi.

xususiyatlari

Noaniq otofloresans ko'pincha murakkab yoki juda zaif yoki juda kuchli hayvon to'qimalarning yoki patogenlarni o'rganish. Biroq, tadqiqotlar qiymati ma'lum bir to'lqin uzunligi hayajonlanib moddiy komponentlari joriy etish va zarur yorug'lik oqimi intensivligini chiqarila kasb etadi. Fluorochromes (aniq yoki ko'rinmas) tuzilmalari biriktirilgan mustaqil qodir bo'yoqlar sifatida harakat. Shunday qilib, ular maqsad uchun yuqori seçicilik va kvant hosil bo'lishi.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Floresans, mikroskopning keng tabiiy va sintetik bo'yoqlar kelishi beri ishlatilgan. Ular emissiya va qo'zg'alishi muayyan tezlik rejimlarni ega va o'ziga xos biologik maqsadlarga maqsadli.

individual molekulalar aniqlash

Ko'pincha, ideal sharoitda, siz alohida element nurlari ro'yxatdan mumkin. Buning uchun, boshqa narsalar orasida, u Amerika futboli, va optik fon etarlicha past shovqin bilan ta'minlash kerak bo'ladi. tufayli 300 ming. fotonlar chiqaradi mumkin nur bilan sayqallash uchun qobiliyatsiz floreseinle molekulasi. jarayonida 20% yig'ish samaradorligini va taxminan 60 ming bir miqdorda ularni ro'yxatdan mumkin.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. ko'chki photodiodes yoki elektron ko'paytirish asosida floresan, mikroskopning, tadqiqotchilar, ikkinchi orqali individual molekulalarning xatti-harakatlarini kuzatishga ruxsat berdi, va ba'zi hollarda, hatto daqiqa.

murakkabligi

optik shovqin fonda oldini foydasiga asosiy masala. Tufayli filtrlar va linzalari ba'zi otofloresans namoyish dizayni ishlatiladigan materiallarning ko'p, erta bosqichlarida olimlarning sa'y-harakatlari past florasanı ega komponentlarini ishlab chiqarish uchun yo'naltirilgan edi aslida. Biroq, keyingi tajribalar yangi xulosalar olib keldi. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Xususan, umumiy ichki aks ettirish asosida floresans, mikroskopning, u past fon va yuqori tezlik uyg'onishi nur erishish imkonini beradi, deb topildi.

mexanizm

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. umumiy ichki aks ettirish asosida nurlanish mikroskop tamoyillari, o'tkinchi to'lqin yoki o'tkinchi foydalanish hisoblanadi. Bu turli bilan ommaviy axborot vositalari o'rtasidagi chegarasida sodir sinishi indeksni. Bu holda, engil nur prizmasi orqali o'tadi. Bu yuqori sinishi indeksi parametr mavjud.

kam parametr bilan suvli eritmasi yoki shisha tutash prizma. yana muhim bir burchakka qaratilgan engil nur bo'lsa, nur to'la interfeys dan qaytariladi. Bu hodisa, o'z navbatida, nonpropagating to'lqinlari sabab bo'ladi. Boshqa so'zlar bilan aytganda, hosil elektromagnit maydon masofada kam 200 nanometr bir past sinishi indeksi parametr bilan o'rta buni.

o'tkinchi to'lqin yorug'lik intensivligi flüorofor tortmaslik uchun yetarli bo'ladi. Biroq, chunki uning juda kichik chuqur, uning hajmi juda kichik bo'ladi. Natijada past darajadagi fon hisoblanadi.

o'zgarish

Floresans, mikroskopning umumiy ichki aks ettirish asosida, Epi-yorug'lik bilan amalga oshirilishi mumkin. Bu yuqori soni intervalli bilan ob'ektiv talab (kamida 1.4, lekin u 1.45-1.6 yetdi, deb orzu qiladi) va qisman dala apparati yoritilgan. ikkinchisi kichik spot hajmi bilan erishiladi. katta turdoshlik uchun oqimining bir qismi tomonidan blokirovka qilinadi ingichka uzuk, foydalanish. jami aks bor, shundan keyin muhim burchak, uchun, biz optikasi botish o'rta va mikroskop qopqog'ini shisha sinishi yuqori darajada kerak.